方波電穿孔儀用于細菌、酵母和其他眾多微生物的電擊轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化時,高壓電脈沖作用于懸浮在小體積高阻介質(zhì)中的樣品。本系統(tǒng)由一個脈沖發(fā)生器(pulse generator)模塊、一個電擊腔(shocking chamber)和一個裝有電極的電擊杯(cuvette)組成。樣本放置于電擊杯的電極之間。Micropulser模塊包含一個電容器,將電容器充電至高電壓,然后模塊將電容器中的電流放電到試管中的樣品中。
方波電穿孔儀的電容放電電路產(chǎn)生具有指數(shù)衰減波形的電脈沖。當電容器放電至樣品時,跨越電極的電壓迅速上升至電壓(or峰值電壓,peak voltage/·也稱為初始電壓,Vo),并隨時間(t)減小,如下式:
其中T=R·C,為時間常數(shù),是脈沖長度的簡便表達式。
R為電路電阻,單位為ohms(歐姆)。
C為電容,單位為microfarad(微法拉)。
根據(jù)方程1,T是電壓下降至峰值電壓1/e(~37%)的時間。MicroPulser的內(nèi)部電路被設(shè)計以使E.co、釀酒酵母及其他許多微生物可以得到電穿孔,轉(zhuǎn)化效率發(fā)生在大約5ms的時間常數(shù)內(nèi)。這些電穿孔條件是通過使用10微法拉電容器和將600歐姆電阻與樣品池并聯(lián)以及將30歐姆電阻與樣品池串聯(lián)來實現(xiàn)的。
方波電穿孔儀除時間常數(shù)外,電場強度是另一個決定轉(zhuǎn)化效率的重要參數(shù)。電場強度E,是施加于電極間的電壓,其中,V為施加的電壓,d為電極間的距離,單位為cm。電場強度和細胞的尺寸(size)決定了橫貫每個細胞的電壓降,正是電壓降可能是電穿孔中電壓效應的重要表現(xiàn)。30歐姆串聯(lián)電阻的目的是在發(fā)生電弧的情況下保護設(shè)備電路。在正常操作條件下,當樣本在高電阻介質(zhì)中,電阻不會影響施加在樣本上的電壓。但是,當樣本的電阻較低時,電阻將降低施加在樣品上的電壓。